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腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一种无包膜的线性双链DNA病毒，具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈，适于短时间内进行基因高表达的实验，与其它病毒相比，腺病毒优势在于插入片段较长，表达活性强。

　　体外应用时，腺病毒载体转基因效率高（接近100%的转导效率），且可转导不同类型的细胞，对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是，在体内应用时，由于腺病毒免疫原性强，感染剧烈，故常会引起动物局部组织炎症反应和机体免疫反应，对动物体征和实验结果的客观性造成影响。


ADV包装和侵染过程

腺病毒包装与纯化

　　腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞，待细胞出现CPE状态后通过收集细胞上清和细胞裂解物，通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。 

　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性，利用此种病变效应可进行病毒定量。
 

 

腺病毒滴度检测

　　检测方法：酶联免疫法腺病毒滴度测定，根据计算感染后染成褐色的阳性细胞数，来计算病毒滴度。
       实验原理：腺病毒感染的阳性细胞表达的衣壳蛋白被染成褐色。
       检测方法：免疫显色方法
       实验原理：通过抗5型腺病毒外壳蛋白的单抗与待感染腺病毒样品的细胞结合，再用HRP标记的二抗与一抗结合，经显色液显色，被感染的细胞变成褐色，根据阳性细胞数，来计算病毒滴度。

 

腺病毒载体优势

       ① 表达快，腺病毒感染细胞后，1-2天即可表达
       ② 载体容量大，感染效率高，常用于感染难感染的细胞
       ③ 不整合到染色体中，无插入致突变性
       ④  具有嗜肝性，易于感染肝细胞，腺病毒的体内应用是用于感染肝脏

　   不过由于腺病毒免疫原性高，对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症，体内应用需谨慎。

不同病毒的生物学特性比较

 

载体选择

　　煊晟兴成生物拥有丰富的腺病毒产品，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒载体可供您选择：

调控方式

载体名称（载体元件顺序）

真核抗性

荧光

启动子

默认标签

载体容量

过表达

pADV-mCMV-MCS-3xFLAG

N/A

N/A

mCMV

3FLAG

>6kb

pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG

N/A

EGFP

mCMV

3FLAG

>5kb

pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP

N/A

EGFP

mCMV

3FLAG

>5kb

pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP

N/A

EGFP

mCMV

3FLAG

>5kb

pADV-mCMV-mCherry-HA

N/A

mCherry

mCMV

HA

>5kb

pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry

N/A

mCherry

mCMV

3FLAG

>5kb

pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG

N/A

mNeonGreen

CMV

3FLAG

>4kb

pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG

N/A

mScarlet

CMV

3FLAG

>4kb

circRNA过表达

pADV-CMV-S-circRNA

N/A

N/A

CMV

N/A

>5kb

miRNA过表达

pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP

N/A

EGFP

U6

N/A

N/A

表达cre

pADV-CMV-Cre

N/A

N/A

CMV

N/A

N/A

干扰

pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP

N/A

EGFP

U6

N/A

N/A

pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry

N/A

mCherry

U6

N/A

N/A

CRISPR敲除

pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9

N/A

N/A

U6

3FLAG

N/A

pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9

N/A

sfGFP

U6

3FLAG

N/A

pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP

N/A

EGFP

U6

N/A

N/A

pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9

N/A

mCherry

CMV

3FLAG

N/A

pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1

N/A

mCherry

CMV

3FLAG

N/A

　　

 

 

应用实例

　　1.[腺病毒, 肝脏]

 

　　

　　感染部位：肝脏

　　

　　载体名称：Ad-CBS

　　

　　注射方式：尾静脉

　　

　　注射量：1 x1011 PFU/mL，10ul

　　

　　检测时间：7天

　　

　　2. [腺病毒, 肝脏]

 

　　

　　感染部位：肝脏

　　

　　载体名称：Ad-ATG7

　　

　　注射方式：尾静脉

　　

　　注射量：1 x109 PFU /只

　　

　　检测时间：10天

　　

　　3.  [腺病毒, 大鼠]

 

　　

　　注射部位：大鼠大脑皮层

　　

　　载体名称：Ad-FBLN

　　

　　注射方式：脑立体定位注射

　　

　　注射量：三种不同剂量

　　

　　检测时间：7天

　　

腺病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程，采用AdEasy及Admax腺病毒包装系统在HEK-293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速密度梯度离心和过滤，并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml，完全可以满足各类实验的使用要求。